BJ5183-AD-1化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86021-01(10×100ul)/BFNC86021-02(50×100ul)

BJ5183-AD-1：                                                   100μl/支

pCAMBIA2301(control vector，10ng/μl):                10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                     -80℃（6個(gè)月）

基因型

endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Str^R) [pAdEasy-1 (Amp^R)]

BJ5183-AD-1化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品說明

BJ5183-AD-1是攜帶了腺病毒質(zhì)粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株，是目前腺病毒系統(tǒng)常用的感受態(tài)細(xì)胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變，賦予BJ5183細(xì)胞較強(qiáng)的重組能力，有利于轉(zhuǎn)入的目的基因與腺病毒骨架質(zhì)粒的重組。endA1（缺失核酸內(nèi)切酶）的突變有利于重組DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株細(xì)胞中已經(jīng)提前轉(zhuǎn)入了腺病毒質(zhì)粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，賦予該菌株氨芐抗性，在病毒質(zhì)粒構(gòu)建時(shí)，只需轉(zhuǎn)入線性化的目的質(zhì)粒即可，簡化了實(shí)驗(yàn)步驟，提高了病毒質(zhì)粒重組概率。Str^R 賦予BJ5183-AD-1菌株鏈霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的BJ5183-AD-1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒(size:1163bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>1×10⁵ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BJ5183-AD-1感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒（含有目標(biāo)基因并線性化），并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. BJ5183-AD-1菌株的質(zhì)粒產(chǎn)量不高。腺病毒構(gòu)建成功后，可選擇在其他大腸桿菌菌株中擴(kuò)繁，純化質(zhì)粒。

4. BJ5183-AD-1感受態(tài)細(xì)胞對溫度敏感，應(yīng)儲(chǔ)存在-80℃超低溫冰箱，避免溫度波動(dòng)，溫度波動(dòng)會(huì)降低感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率。